Таксифолин/дигидрокверцетин защищает клетки пигментного эпителия сетчатки от апоптоза

Таксифолин/дигидрокверцетин защищает клетки пигментного эпителия сетчатки  от апоптоза, вызванного окислительным стрессом

2017; 23: 520–528.

Опубликовано онлайн 2017 г. 27 июля.

PMID: 28761325

PMCID: PMC5534490

Xiaobin Xie , ^1, 2 Jun Feng , ^1, 2 Zefeng Kang , ¹ Shoukang Zhang , ¹ Lixia Zhang , ¹ Yan Zhang , ¹ Xuefei Li , ¹  Youzhi Tang ^1, 2

1 Офтальмологическая клиника Китайской академии медицинских наук, Пекин, Китай

2 Постдокторская исследовательская станция при Китайской академии китайских медицинских наук, Пекин, Китай

Введение

Возрастная дегенерация желтого пятна (возрастная макулярная дегенерация, ВМД) представляет собой прогрессирующее заболевание глаз, вызванное дегенерацией фоторецепторов и соседних клеток RPE (Retinal pigment epithelium, пигментного эпителия сетчатки) в макуле, центральной части сетчатки. 

ВМД является основной причиной необратимых нарушений зрения и слепоты среди людей в возрасте 60 лет и старше [1,2]. Это многофакторное заболевание позднего начала, и предполагается, что вызванное окислительным стрессом повреждение клеток RPE является важным фактором ВМД [3 - 5]. Окислительный стресс продуцирует активные формы кислорода (АФК) и нерадикальные формы, такие как H₂O₂, которые повреждают компоненты RPE, приводя к апоптотической гибели [6 - 8]. Поэтому наши исследования были сосредоточены на методах защиты клеток RPE от повреждения, вызванного окислительным стрессом.

Таксифолин (3,5,7,3 ', 4'-пентагидроксифлаванон или 2,3-дигидрокверцетин), флавоноид, широко содержится в цитрусовых, винограде, оливковом масле и луке (и древесине сибирской лиственницы, которая является практически неисчерпаемым запасом таксифолина – прим. перев). [ 9 - 11 ]. Как обычный биоактивный компонент пищевых продуктов и трав, таксифолин/дигидрокверцетин оказывает широкий спектр биохимических и фармакологических эффектов, включая:

• противоопухолевое,
• противовоспалительное,
• антидиабетическое,
• гепатозащитное,
• кардиозащитное,
• нейропротективное действие, и способствует профилактике болезни Альцгеймера [12 - 20]. 

Важно отметить, что таксифолин оказывает значительное антиоксидантное действие, которое имеет решающее значение для предотвращения наступления апоптоза. Кроме того, было обнаружено, что таксифолин ингибирует окислительные ферменты и перепроизводство АФК, таким образом улучшая церебральную ишемию-реперфузионное повреждение [22].

Однако потенциальные защитные эффекты таксифолина/дигидрокверцетина на ВМД не были изучены. Поэтому в настоящем исследовании мы изучили цитопротективное действие таксифолина/дигидрокверцетина на окислительный стресс, вызванный перекисью водорода в клетках RPE, и изучили основные механизмы.

Методы исследования

Клеточная культура и химические вещества

Клеточная линия RPE, ARPE-19, была получена из Американской коллекции типовых культур (Manassas, VA, Приложение 1). Клетки содержали в модифицированной Дульбекко среде Игла (Gibco, Carlsbad, CA), содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS; HyClone, Logan, UT). Содержали  при 37 ° C в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ . Таксифолин/дигидрокверцетин, H ₂ O ₂ , 2'7'-дихлордигидрофлуоресцеина диацетат (DCFDA) и все другие стандартные химические вещества были приобретены у Sigma (Сент-Луис, Миссури).

Анализ жизнеспособности клеток

Жизнеспособность клеток определяли с использованием анализов 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолия бромида (МТТ). Вкратце, клетки высевали с плотностью 3 × 10 ⁴ клеток / лунку в 96-луночные планшеты. (Эта плотность приводит к> 90% слияния в течение 24 часов). 

После 24 ч инкубации в каждую лунку добавляли свежую среду, содержащую 10% FBS и 20 мкл раствора МТТ (5 мг / мл). Планшет инкубировали в течение дополнительных 4 ч при 37 °С и измеряли оптическую плотность при 540 нм с использованием устройства для считывания микропланшетов (BioTek, Winooski, VT). Каждое отдельное измерение повторяли три раза.

Анализ апоптоза

Клетки окрашивали с использованием набора для определения апоптоза FITC Annexin V (556 547, BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) в соответствии с инструкциями производителя и подвергали анализу с помощью проточной цитометрии (FACScan, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ). Результаты представлены в виде средних значений из трех независимых определений.

Измерение клеточных АФК

Внутриклеточные активные формы кислорода измеряли проточной цитометрией с использованием набора для обнаружения АФК (S0033, Beyotime, Шанхай, Китай). Вкратце, клетки промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) после обработки. Затем клетки инкубировали с 15 мкМ DCFDA в течение 30 мин при 37 ° С. Затем клетки подвергали анализу с использованием проточного цитометра FACSCalibur (BD Biosciences). Внутриклеточные уровни АФК выражены как средняя интенсивность флуоресценции клеток DCFDA.

Вестерн-блоттинг-анализ

После обработки таксифолином клетки собирали центрифугированием. Клеточные экстракты готовили, промывая клетки и лизируя их в буфере, содержащем ингибитор протеазы. Концентрации белка измеряли с использованием набора для анализа белка BCA (P0009, Beyotime). Равные количества белка загружали, отделяли додецилсульфатом натрия ПААГ и затем переносили на поливинилидендифторидную мембрану. После блокирования 5% -ным молоком в течение 1 часа при комнатной температуре мембраны инкубировали с первичными антителами с последующей инкубацией с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена. Белковые полосы визуализировали с использованием усиленного хемилюминесцентного субстрата (Thermo Scientific, Rockford, IL).

Экстракция РНК и количественная ПЦР в реальном времени

Тотальную РНК экстрагировали с использованием реагента TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA) в соответствии с инструкциями производителя. Количество и чистоту общей РНК анализировали с помощью ультрафиолетового спектрофотометра при 260 нм. Кроме того, кДНК была обратно транскрибирована из общей РНК с использованием набора SuperScript III (12 574, Invitrogen). Количественную ПЦР в реальном времени проводили с использованием флуоресцентной системы количественной ПЦР ABI PRISM 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA). Каждый образец измеряли в трех экземплярах.

Уровни Nrf2 подавляли путем временной трансфекции клеток ARPE-19 миРНК Nrf2 (5'-CACACTGGATCAGACAGGAGGATAT-3 '; Genepharm, Shanghai) и Lipofectamine 2000 (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. В качестве отрицательного контроля клетки трансфицировали мРНК отрицательного контроля (si-NC; Genepharm). Эффективность подавления была оценена вестерн-блоттингом.

Статистический анализ

Все статистические анализы были выполнены с использованием программного обеспечения SPSS 18.0 (SPSS, Chicago, IL). Данные, по меньшей мере, трех независимых экспериментов, каждый из которых выполнен в трех экземплярах, представлены как среднее ± стандартное отклонение (SD). Значимость различий между группами оценивали с использованием одностороннего ANOVA. Значения считали статистически значимо различными при р <0,05.

Результаты

Таксифолин/дигидрокверцетин ингибирует снижение жизнеспособности клеток RPE, вызванных перекисью водорода

Чтобы определить, оказывает ли таксифолин цитотоксическое действие на клетки RPE человека, мы инкубировали клетки ARPE-19 с разными концентрациями таксифолина/дигидрокверцетина в течение 24 часов. 

На рисунке 1А показано, что не было значительного различия в жизнеспособности клеток между необработанными и обработанными таксифолином/дигидрокверцетином группами, даже при высокой концентрации таксифолина (100 мкг/мл). Было показано, что H ₂ O ₂ моделирует окислительное повреждение клеток [23]. Поэтому мы инкубировали клетки ARPE-19 в течение 24 часов с различными концентрациями H ₂ O ₂ . 

Рисунок 1B показывает, что H ₂ O ₂ – это зависимое от дозы снижение жизнеспособности клеток ARPE-19 человека с особенно сильным ингибированием, наблюдаемым при высокой концентрации (0,4 мМ) H₂O ₂. Поэтому 0,4 мМ H ₂ O ₂ использовали в следующих экспериментах. 

Как показано на рисунке 1С, жизнеспособность клеток ARPE-19 значительно и дозозависимо возрастала, когда клетки инкубировали с 0,4 мМ H₂O₂ в присутствии различных концентраций таксифолина в течение 24 часов. Вместе эти результаты демонстрируют, что таксифолин/дигидрокверцетин ингибирует вызванное H₂O₂ снижение жизнеспособности клеток эпителия сетчатки дозозависимым образом.
 

Рисунок 1

Таксифолин/дигидрокверцетин предотвращал снижение жизнеспособности пигментных эпителиальных клеток сетчатки, вызванное  Н₂O₂ . 

A : Клетки ARPE-19 инкубировали с различными концентрациями таксифолина (0, 10, 20, 50 и 100 мкг / мл) в течение 24 часов. 

B : Клетки ARPE-19 обрабатывали различными концентрациями H ₂ O ₂ (0, 50, 100, 200 и 400 мкМ) в течение 24 часов. 

C : клетки ARPE-19 обрабатывали 0,4 мМ H ₂ O _{2 в} течение 24 часов в присутствии различных концентраций таксифолина. 

Данные представлены как среднее значение ± SD (n = 3); * р <0,05, ** р <0,01 и *** р <0,001.

После того, как мы продемонстрировали, что таксифолин/дигидрокверцетин ингибирует снижение жизнеспособности клеток ARPE-19, вызванное перекисью водорода, мы исследовали, участвует ли апоптоз в этом процессе и ингибирует ли таксифолин пенекисной апоптоз. 

Мы разделили клетки ARPE-19 на четыре группы: контрольная группа, группа, обработанная таксифолином, группа, обработанная H₂O₂ (0,4 мМ), и H₂O₂ (0,4 мМ) плюс таксифолин/дигидрокверцетин (100 мкг / мл) - обработанная группа. После инкубации в течение 24 часов четыре группы окрашивали аннексином V-пропидий-йодидом (PI), и для определения скорости апоптоза использовали проточную цитометрию. 

На рисунке 2 (а, б) показано, что H₂O₂ (0,4 мМ) индуцировали апоптоз клеток ARPE-19, при этом более 5% клеток демонстрируют ранние апоптотические признаки (PI-/-и аннексин V+/+), а еще 50% клеток демонстрируют поздние апоптотические признаки (PI+/+, аннексин V +/+). В то время как введение таксифолином 100 мкг/мл ингибировало скорость апоптоза клеток ARPE-19. 

Кроме того, на рисунке 2 (с) показано, что таксифолин/дигидрокверцетин уменьшал расщепление поли(АДФ-рибозо-) полимеразы (PARP), индуцированное H₂O₂. 

Прим. перев: Поли(АДФ-рибоза)-полимеразы (PARP) — ферменты, катализирующие поли-АДФ-рибозилирование, один из видов посттрансляционной модификации белков. В некоторых случаях нарушения в комплексе репарации ДНК приводят к канцерогенезу.

Между тем, не было значительной разницы между контрольной и таксифолиновой (100 мкг/мл) группами. Эти результаты демонстрируют, что таксифолин/дигидрокверцетин ингибирует H₂O₂ -индуцированный апоптоз клеток ARPE-19.
 

Рисунок 2

Таксифолин ингибировал перекисной апоптоз в клетках RPE. 

А: Клетки ARPE-19 были разделены на четыре группы: контрольная группа, группа, обработанная таксифолином, группа, обработанная перекисью водорода (0,4 мМ), и (0,4 мМ) плюс таксифолин (100 мкг/мл) обработанная группа. Запись с помощью проточной цитометрии показывает скорость апоптоза клеток RPE.

В: Количественные данные показывают скорость апоптотических клеток, обнаруженных с помощью проточной цитометрии.

С: Уровни экспрессии расщепления PARP определяли с помощью вестерн-блоттинга. 

Данные представлены как среднее значение ± SD (n = 3); * р <0,05, ** р <0,01 и *** р <0,001.

Таксифолин/дигидрокверцетин ингибирует продукцию АФК, вызванную перекисью водорода

Затем мы проверили, влияет ли таксифолин на продуцирование АФК, вызванное H₂O₂ . Клетки ARPE-19 были разделены на три группы: контрольная группа, группа, обработанная H₂O₂ , и группа, обработанная H₂O₂ плюс таксифолин. После инкубации в течение 24 часов мы использовали флуоресценцию DCFDA для регистрации продукции внутриклеточных АФК. 

На рисунке 3 А показано, что обработка таксифолином/дигидрокверцетином резко ингибировала индуцируемую H₂O₂ продукцию форм кислорода в клетках ARPE-19. Кроме того, рисунок 3 в  показывает, что, несмотря на повышенные концентрации H₂O₂ Таксифолин/дигидрокверцетин проявлял дозозависимое ингибирование внутриклеточной продукции АФК, как определено количественным анализом.
 

Рисунок 3

Таксифолин/дигидрокверцетин ингибировал индуцированную  внутриклеточную генерацию активных форм кислорода.

А: Клетки ARPE-19 были разделены на три группы, включая контрольную группу, группу, обработанную H ₂ O ₂ , и группу, обработанную H2O2 плюс таксифолин. После инкубации в течение 24 ч флуоресценцию DCFDA использовали для регистрации продукции внутриклеточных АФК.

В: Таксифолин/дигидрокверцетин значительно снижал выработку АФК в клетках ARPE-19. 

Данные представлены как среднее значение ± SD (n = 3); * р <0,05, ** р <0,01 и *** р <0,001.

Таксифолин/дигидрокверцетин активирует м-РНК и белковые экспрессии NRF2, HO-1, NQO1 и GCLM

Как показано выше, таксифолин/дигидрокверцетин защищал клетки ARPE-19 от окислительного стресса путем ингибирования продукции АФК, индуцированной H₂O₂ . Сообщалось, что главный фактор транскрипционного ядерного фактора (эритроидный 2) -подобный 2 (NRF2) играет важную роль в антиоксидантных реакциях и активирует, в ответ на АФК, экспрессию цитопротективных генов, таких, как кодирующие фазу II ферменты [ 24 ]. 

Для дальнейшего изучения антиоксидантных механизмов таксифолина мы определили уровни экспрессии NRF2, гемоксигеназы-1 (HO-1), NAD (P) H-хининоксидоредуктазы 1 (NQO1) и модификатора глутамат-цистеинлигазы (GCLM) и каталитические (GCLC) субъединицы. 

Как показано на рисунке 4А, обработка таксифолином/дигидрокверцетином в течение 24 ч усиливала экспрессию белков NRF2, HO-1, NQO1 и GCLM в клетках ARPE-19 дозозависимым образом. На рисунке 4В показано, что экспрессии мРНК NRF2, HO-1, NQO1 и GCLM также значительно повышались при обработке таксифолином в течение 24 часов. Эти результаты позволяют предположить, что таксифолин защищает клетки ARPE-19 от окислительного стресса путем активации NQO1, HO-1, GCLC и GCLM.

Рисунок 4

Таксифолин/дигидрокверцетин увеличивал экспрессию мРНК и белка у ядерного фактора (эритроидного 2) -подобного 2 (NRF2), гемоксигеназы (HO) -1, NAD (P) H-хининоксидоредуктазы 1 (NQO1) и модификатора глутамат-цистеинлигазы (GCLM) ).

А: Клетки обрабатывали 10, 20 и 50 мкМ таксифолина в течение 24 часов. Вестерн-блот анализ проводили с использованием соответствующих антител.

В: Извлекали общую РНК, и количества мРНК NRF2, HO-1, NQO1 и GCLM количественно определяли с помощью ПЦР в реальном времени и нормализовали до соответствующих количеств мРНК β-актина. 

Данные представлены как среднее значение ± SD (n = 3); * р <0,05, ** р <0,01 и *** р <0,001.

Nrf2 опосредует вызванный таксифолином/дигидрокверцетином цитопротекторный эффект RPE против H ₂ O ₂

SiRNA была использована для изучения того, защищает ли вызванная таксифолином активация Nrf2 клетки от апоптоза, вызванного окислительным стрессом, с помощью H₂O₂ . Клетки, обработанные sr-РНК Nrf2, продемонстрировали значительно более низкие уровни Nrf2 по сравнению с необработанными клетками и клетками, трансфицированными siРНК (si-NC), подвергнутыми отрицательному контролю (рисунок 5 а). 

В состоянии без стресса подавление Nrf2 приводит к незначительному снижению жизнеспособности клеток. Когда клетки обрабатывали H₂ O₂ , отсутствие Nrf2 имело гораздо более низкую выживаемость и более высокую скорость апоптоза, чем клетки, трансфицированные si-NC ( рисунок 5 б). 

Кроме того, снижение H₂O₂  в таксифолин-индуцированном расщеплении полимеразы (PARP) также было отменено после сайленсинга (ингибирования) Nrf2. Эти данные указывают на то, что таксифолин способствует выживанию клеток посредством активации Nrf2 (рисунок 5 с).

Рисунок 5

Nrf2 опосредует вызванный таксифолином цитопротекторный эффект против пероксида водорода в клетках ARPE-19. 

А: клетки RPE, трансфицированные si-Nrf2 или si-NC в присутствии таксифолина. Вестерн-блот анализ проводили для измерения уровней Nrf2 с использованием соответствующих антител. 

В : Жизнеспособность клеток и апоптоз измеряли в клетках ARPE-19.

С: Вестерн-блот анализ расщепленного PARP в клетках ARPE-19. 

Данные представлены как среднее значение ± SD (n = 3); * р <0,05, ** р <0,01 и *** р <0,001.

Обсуждение

ВМД является одной из наиболее важных причин слепоты у пожилых людей [25], и было предположено, что окислительный стресс играет важную роль в патофизиологии ВМД [9]. Большинство факторов риска развития AMD, за исключением генетической предрасположенности, таких, как:

• возраст старше 65 лет,
•  курение сигарет,
•  ожирение,
•  воздействие синего света  - приводят к окислительному стрессу в сетчатке [26 - 28]. 

Кроме того, окислительный стресс усугубляется наличием липофусцина [29]. Следовательно, защита клеток RPE от окислительного повреждения является важным фактором для лечения ВМД. В этом исследовании мы обнаружили, что таксифолин проявляет защитные эффекты против окислительного повреждения в культивируемых клетках ARPE-19, что указывает на его потенциальную клиническую значимость в качестве нового эффективного терапевтического лечения ВМД.

Таксифолин является производным флавоноидов, которые широко распространены в продуктах питания и травах [30]. Он проявляет широкий спектр биоактивных эффектов, среди которых антиоксидантная активность довольно отчетлива [9]. В настоящем исследовании мы впервые обнаружили, что таксифолин защищает клетки ARPE-19 от апоптоза, вызванного окислительным стрессом. Мы приняли классическую модель, которая включает добавление H₂O₂ к культивируемым клеткам, чтобы проверить чувствительность клеток ARPE-19 к окислительному стрессу и антиоксидантную эффективность таксифолина, и мы продемонстрировали, что H₂O₂ индуцировал снижение жизнеспособности клеток ARPE-19. 

Однако лечение таксифолином ингибировало снижение жизнеспособности клеток дозозависимым образом. 

Сообщалось, что окислительный стресс играет важную роль в апоптозе клеток [31,32]. В этом исследовании мы обнаружили, что H₂O₂ индуцировал апоптоз клеток ARPE-19, который подавлялся лечением таксифолином. Кроме того, мы обнаружили расщепление PARP, которое часто ассоциируется с апоптозом и служит одним из признаков апоптоза и активации каспазы [33]. Вестерн-блот анализ показал, что таксифолин уменьшал H₂O_2-индуцированное расщепление PARP. Кроме того, используя флуоресценцию DCFDA, мы обнаружили, что таксифолин ингибирует индуцируемую H₂O₂ внутриклеточную генерацию АФК. Следовательно, эти результаты демонстрируют, что таксифолин защищает клетки ARPE-19 от повреждения клеток, вызванного H₂O₂ , благодаря его антиапоптотическому и антиоксидантному эффектам.

В дальнейшем мы исследовали потенциальные антиоксидантные механизмы таксифолина. Сообщалось, что главный транскрипционный фактор - NRF2 активирует экспрессию цитопротективных генов в ответ на АФК и ослабляет окислительный стресс [34 - 36]. В состоянии покоя NRF2 подвергается убиквитин-опосредованной протеасомной деградации посредством взаимодействий с его компонентом, связанным с Kelch-подобным эпихлоргидрином (ECH), связанным с белком 1 (KEAP1) [37]. После активации окислительными стимулами NRF2 диссоциирует от KEAP1 и затем транслоцируется в ядро, где он активирует транскрипцию генов-мишеней и активирует уровни защитных ферментов фазы II, таких как HO-1, NQO1 и GCLM [38 - 41]. 

Кроме того, исследования показали, что таксифолин/дигидрокверцетин активирует путь NRF2, чтобы прекратить передачу сигналов Wnt/β-катенин, опосредованную ядерным фактором, в канцерогенезе толстой кишки [ 42 ]. 

Мы исследовали, влияет ли таксифолин на путь NRF2, и способствует ли он экспрессии ферментов фазы II в клетках ARPE-19. Результаты вестерн-блоттинга показали, что обработка таксифолином увеличивала уровни белка и экспрессию м-РНК NRF2, HO-1, NQO1 и GCLM дозозависимым образом. 

Кроме того, мы обнаружили, что клетки ARPE-19 погибали, несмотря на обработку таксифолином после подавления Nrf2 в присутствии пероксида водорода. Таким образом, эти результаты позволяют предположить, что защитные эффекты таксифолина, вероятно, включают усиление регуляции NRF2 и усиление антиоксидантной ферментной системы фазы II.

Заключение

Настоящее исследование выявило новую функцию таксифолина - защищать клетки эпителия сетчатки от окислительного стресса путем ингибирования, вызванного перекисным снижением жизнеспособности клеток, апоптоза клеток и внутриклеточной генерации АФК. 

Потенциальный механизм, по-видимому, включает в себя активацию NRF2 и активацию антиоксидантной ферментной системы фазы II. Наши результаты предоставляют важную информацию о таксифолине как потенциальном терапевтическом агенте для профилактики и лечения возрастной макулодистрофии сетчатки.

Список литературы и ссылки

1. Ву Дж. М., Шин Д.Ю., Ли С.Дж., Джо Й., Чжэн М, Йим Дж.Х., Каллавей З, Чунг ХТ. Куркумин защищает пигментные эпителиальные клетки сетчатки от окислительного стресса путем индукции экспрессии гемоксигеназы-1 и снижения реактивного кислорода. Мол Вис. 2012; 18 : 901–8. 

2. Седдон Дж. М., Джордж С., Роснер Б., Рифаи Н. Прогрессия возрастной макулярной дегенерации: проспективная оценка С-реактивного белка, интерлейкина 6 и других сердечно-сосудистых биомаркеров. Арка Офтальмол. 2005; 123 : 774–82. 

3. Шоу П.Х., Стайлз Т, Дуглас С, Хо Д, Фан В., Ду Х, Сяо Х. Окислительный стресс, врожденный иммунитет и возрастная дегенерация желтого пятна. Цели Mol Sci. 2016; 3 : 196–221. 

4. Илдирим З., Уцгун Н.И., Илдирим Ф. Роль окислительного стресса и антиоксидантов в патогенезе возрастной макулярной дегенерации. Клиники (Сан-Паулу, Бразилия) 2011; 66 : 743–6. 

5. Дробек-Словик М., Карчевич Д., Сафранов К. Потенциальная роль окислительного стресса в патогенезе возрастной макулярной дегенерации (ВМД). Постепы Hig Med Dosw (Online) 2007; 61 : 28–37. 

6. Ван Лукерен Кампань М., Лекутер Дж., Яспан Б.Л., Е.В. Механизмы возрастной дегенерации желтого пятна и терапевтические возможности. J Pathol. 2014; 232 : 151–64. 

7. Ли К.Р., Ян С.К., Гун Ю.К., Ян Х., Ли Х.М., Чжао Ю.Х., Яо Дж., Цзян Ц, Цао C. 3H – 1,2-дитиол-3-тион защищает клетки пигментного эпителия сетчатки от ультрафиолетового излучения через активацию Akt-mTORC1-зависимой передачи сигналов Nrf2-HO-1. Sci Rep. 2016; 6 : 25525

8. Валко М., Родос С. Дж., Монкол Дж., Изакович М., Мазур М. Свободные радикалы, металлы и антиоксиданты при окислительном стресс-индуцированном раке. Хим Биол Взаимодействовать. 2006; 160 : 1–40. 

9. Topal F, Nar M, Gocer H, Kalin P, Kocyigit UM, Gülçin İ, Alwasel SH. Антиоксидантная активность таксифолина: отношение активности к структуре. J Энзим Ингиб Мед Хим. 2015; ••• : 1–10. 

10. Шаусс А.Г., Целыко С.С., Кузнецова В.А., Егорова И. Токсикологическая и генотоксическая оценка дигидрокверцетина, богатого экстрактом даурской лиственницы (Larix gmelinii Rupr) (лавитол). Int J Toxicol. 2015; 

11. Слимешад Р., Фоссен Т., Воген И. М.. Лук: источник уникальных диетических флавоноидов. J Agric Food Chem. 2007; 55 : 10067–80. 

12. Ой Н., Чен Х., Ким М.О., Любет Р.А., Боде А.М., Донг З. Таксифолин подавляет канцерогенез кожи, вызванный ультрафиолетом, путем воздействия на EGFR и PI3K. Cancer Prev Res (Phila) 2012; 5 : 1103–14. 

13. Гупта М, Бхалла Т, Гупта Г, Митра С, Бхаргава К. Противовоспалительная активность таксифолина. Jpn J Pharmacol. 1971; 21 : 377–82. 

14. Сун Х, Чен Рк, Ян Ж, Сунь Гб, Ван М, Ма Сдж, Ян Лж, Сунь Хб. Таксифолин предотвращает диабетическую кардиомиопатию in vivo и in vitro путем ингибирования окислительного стресса и клеточного апоптоза. Пищевой Хим Токсикол. 2014; 63 : 221–32. 

15. Gocer H, Topal F, Topal M, Kucuk M, Teke D, Gulcin I, Alwasel SH, Супуран CT. Профили ингибирования таксифолина I и II изоферментов ацетилхолинэстеразы и карбоангидразы. J Энзим Ингиб Мед Хим. 2016; 31 : 441–7. 

16. Чжао М, Чэнь Дж, Чжу П, Фуджино М, Такахара Т, Тояма С, Томита А, Чжао Л, Ян З, Хей М, Чжун Л, Чжуан Дж, Кимура С, Ли ХК. Дигидрокверцетин (DHQ) улучшал экспериментальный молниеносный гепатит, индуцированный конканавалином А, и усиливал экспрессию HO-1 посредством антиоксидантного пути MAPK / Nrf2 в клетках RAW. Int Immunopharmacol. 2015; 28 : 938–44. 

17. Го Х, Чжан X, Цуй Y, Чжоу Х, Сюй Д, Шань Т, Чжан Ф, Го Й, Чэнь Ю, У Д. Таксифолин защищает от сердечной гипертрофии и фиброза во время биомеханического стресса от перегрузки давлением. Toxicol Appl Pharmacol. 2015; 287 : 168–77. 

18. Док-Го Х., Ли К.Х., Ким Г.Дж., Ли Э.Х., Ли Дж., Сонг Й.С., Ли Й.Х., Джин С., Ли Й.С., Чо Дж. Нейропротекторные эффекты антиоксидантных флавоноидов, кверцетина, (+) - дигидрокверцетина и кверцетина 3 -метиловый эфир, выделенный из Opuntia ficus-indica var. Saboten. Brain Res. 2003; 965 : 130–6. 

19. Ван Й.Х., Ван В.Ю., Чанг С.К., Лиу К.Т., Сун Ю.Дж., Ляо Дж.Ф., Чен К.Ф., Чанг С., Хоу Ю.С., Чоу Ю.С., Шень Ю.С. Таксифолин облегчает церебральную ишемию-реперфузионное повреждение у крыс благодаря его антиоксидантному эффекту и модуляции активации NF-каппа B. J Biomed Sci. 2006; 13 : 127–41. 

20. Манигандан К., Манимаран Д., Джаярадж Р.Л., Елангован Н., Дивья В., Кафле А. Таксифолин обуздывает NF-kappaB-опосредованную передачу сигналов Wnt / бета-катенин через активирующий путь Nrf2 в экспериментальном канцерогенезе толстой кишки. Biochimie. 2015; 119 : 103–12. 

21. Владимиров Ю.А., Проскурнина Е.В., Демин Е.М., Матвеева Н.С., Любицкий О.Б., Новиков А.А., Измайлов Д.Ю., Осипов А.Н., Тихонов В.П., Каган В.Е. Дигидрокверцетин (таксифолин) и другие флавоноиды как ингибиторы образования свободных радикалов на ключевых стадиях апоптоза. Биохимия (Москва) 2009; 74 : 301–7. 

22. Voulgari C, Papadogiannis D, Tentolouris N. Диабетическая кардиомиопатия: от патофизиологии миоцитов сердца до современных стратегий диагностики и лечения. Vasc Health Risk Manag. 2010; 6 : 883–903. 

23. Качара П., Сарна Т., Берк Дж. Динамика доступности H 2 O 2 для культур ARPE-19 на моделях окислительного стресса. Free Radic Biol Med. 2010; 48 : 1064–70. 

24. Нгуен Т., Ян К.С., Пикетт С.Б. Пути и молекулярные механизмы, регулирующие активацию Nrf2 в ответ на химический стресс. Free Radic Biol Med. 2004; 37 : 433–41. 

25. Фридман Д.С., О'Колмейн Б.Дж., Муньос Б., Томани С.К., Маккарти С., Де Йонг П.Т., Немесуре Б., Митчелл П., Кемпен Дж. Распространенность возрастной дегенерации желтого пятна в США. Арка Офтальмол. 2004; 122 : 564–72. 

26. Bowes Rickman C, Farsiu S, Toth CA, Klingeborn M. Сухая возрастная дегенерация желтого пятна: механизмы, терапевтические мишени и визуализация. Инвест Офтальмол Vis Sci. 2013; 54 : Орсф68–80. 

27. Ханус Дж., Колкин А., Чимьенти Дж., Боцай С., Ван С. 4-Ацетоксифенол предотвращает вызванный окислительным стрессом некроз RPE, действуя в качестве стабилизатора NRF2. Инвест Офтальмол Vis Sci. 2015; 56 : 5048–59. 

28. Чу Е.Ю., Клемонс Т.Е., Агрон Е., Спердуто Р.Д., Сан Джованни Дж.П., Дэвис М.Д., Феррис ФЛ. Десятилетнее наблюдение возрастной макулярной дегенерации в исследовании возрастных заболеваний глаз: отчет AREDS №. 36. JAMA Ophthalmol. 2014; 132 : 272–7. 

29. Дробек-Словик М., Карчевич Д., Сафранов К. Потенциальная роль окислительного стресса в патогенезе возрастной макулярной дегенерации (ВМД). Постепы Hig Med Dosw (Online) 2007; 61 : 28–37. 

30. Су Дж, Ши ХХ, Ван Л.Дж., Го Р.Х., Рен Т.К., Ву Й.Б. Химические составляющие коры Taxus chinensis var. mairei]. Чжун Яо Цай = Чжунъяо Цай = Чжун Яо Цай. 2014; 37 : 243–51. 

31. Хуллар М., Аль-Шудифат А.А.-РС, Людке А., Бинепал Г., Сингал ПК. Окислительный стресс: ключевой фактор, влияющий на диабетическую кардиомиопатию. Этот обзор является одним из ряда статей, опубликованных в специальном выпуске по окислительному стрессу в области здравоохранения и заболеваний. Can J Physiol Pharmacol. 2010; 88 : 233–40. 

Читать далее: 2 страница